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上海郑核生物科技有限公司 
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| 石蜡切片免疫组化实验报告及结果展示-上海郑核 |
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- 发布时间：2021年10月14日
- 有 效 期：2022年04月15日
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一、实验器材及试剂
1、实验器材
2、主要实验试剂
试剂 厂家 货号 稀释比
无水乙醇 国药集团化学试剂有限公司
二甲苯 国药集团化学试剂有限公司
柠檬酸（PH6.0)抗原修复液 Servicebio G1202
PBS缓冲液 Servicebio G0002
3%双氧水 Servicebio G0115
BSA Servicebio G5001
苏木素染液 Servicebio G1004
苏木素分化液 Servicebio G1039
苏木素返蓝液 Servicebio G1040
中性树胶 Servicebio G1403
一抗：CD43 Servicebio GB14036 1:200
一抗：VEGFR2 三鹰 26415-1-AP 1:200
二抗：HRP标记山羊抗兔二抗 Servicebio GB23303 1：200
二抗：HRP标记山羊抗小鼠二抗 Servicebio GB23301 1:200
组化试剂盒DAB显色剂 Servicebio G1211
二、石蜡切片免疫组化实验步骤
1、石蜡切片脱蜡至水：依次将切片放入二甲苯Ⅰ15min-二甲苯Ⅱ15min-二甲苯III 15min-无水乙醇Ⅰ5min-无水乙醇Ⅱ5min-85%酒精5min-75%酒精5min-蒸馏水洗。
2、抗原修复：组织切片置于盛满柠檬酸抗原修复缓冲液（PH6.0）的修复盒中于微波炉内进行抗原修复，中火10min至沸，停火5min保温再转中低火5min，停火2min,，转中低火5min，此过程中应防止缓冲液过度蒸发，切勿干片。自然冷却后将玻片置于PBS（PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。
3、阻断内源性过氧化物酶：切片放入3%双氧水溶液，室温避光孵育25 min，将玻片置于PBS（PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。
4、血清封闭:在组化圈内滴加3%BSA 均匀覆盖组织，室温封闭30min。 （一抗是山羊来源的用兔血清封闭，其他来源的用BSA封闭）
5、加一抗：轻轻甩掉封闭液，在切片上滴加PBS按一定比例配好的一抗，切片平放于湿盒内4°C孵育过夜。（湿盒内加少量水防止抗体蒸发）
6、加二抗：玻片置于PBS（PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。切片稍甩干后在圈内滴加与一抗相应种属的二抗（HRP标记）覆盖组织，室温孵育50min。
7、DAB显色：玻片置于PBS（PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。切片稍甩干后在圈内滴加新鲜配制的DAB显色液，显微镜下控制显色时间，阳性为棕黄色，自来水冲洗切片终止显色。
8、复染细胞核：苏木素复染3min左右，自来水洗，苏木素分化液分化数秒，自来水冲洗，苏木素返蓝液返蓝，流水冲洗。
9、脱水封片：将切片依次放入75%酒精5min-85%酒精5 |
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